Dış Kaynaklı Proje Süreçleri Yönetim Sistemi
Gençay göksu A. (Danışman (Yürütücü Gerçek Kişi Olan Projede)), Kökkaya S.
proje doktora tez araştırmasının bir parçası olup, proje kurgusundan önceki çalışmalar Erciyes Üniversitesi BAP birimi tarafından destek almıştır (TDK-2022-12061). Ayrıca proje çalışması için Erciyes Üniversitesi Hayvan Deneyleri Yerel Etik Kurul (Karar No: 21/107) izni alınmıştır. Proje iş paketleri 3 ana başlıkta gerçekleştirilmektedir ve ilk aşama başarı ile tamamlanmıştır. Diğer aşamalara başlanılmakta olup bu aşamalarda çalışmanın bilimsel niteliğinin artırılması için kritik malzemelere ihtiyaç duyulmaktadır ve bunlar için yeterli bütçe bulunamamıştır. Proje çalışmasının 1. aşamasında Canine distempervirus, Köpek Gençlik Hastalığı şüpheli/pozitif köpeklerden örnekler alınarak RT-PCR ile doğrulaması yapılmıştır. Daha sonra pozitif bulunan örnekler Vero ve MDCK hücre hatlarına ekilerek kör pasajlama yöntemi ile en az 3 defa pasajlama yöntemine gidilmiştir. Projenin 34388 kayıt numaralı örneği hem Vero hem de MDCK hücre kültürüne adapte edilmiştir. Elde edilen bu CDV izolatı, fare ve tavşan immunizasyonları için kullanılacaktır. Proje çalışmasının 2. aşamasında immunizasyonlara başlanılarak monoklonal ve poliklonal antikor üretimine geçilecektir. Monoklonal antikor üretimi için; fare immunizasyonları tamamlandıktan sonra servikal dislokasyon ile sakrifiye edilerek dalağı steril ortamda çıkartılacaktır. Daha sonra dalak hücreleri ayrıştırılarak F0 myeloma hücreleri ile birleştirilecektir (füzyon aşaması). Bu aşama da gerekli olan malzemelerin birçoğu alınmış olup OPI (oxaloacetate, pyruvate, insulin) medyumuna ihtiyaç duyulmaktadır. OPI medium, hibridomaların enerjilerini sağlamak için kullanılmaktadır. Monoklonal ve poliklonal antikorlar geliştirildikten sonra antikorların saflaştırılması için protein G kolonuna ihtiyaç duyulmaktadır. Affinite kromotografisi sayesinde yüksek düzeyde saf IgG elde edilecektir. Saflaştırılma yapıldıktan sonra projenin 3. aşamasına geçilebilecektir. 3. aşama olarak antijen-ELISA test yöntemi geliştirilecektir. Bu işlem aşamasında konjugat (enzim ile işaretli antikor) kullanılabilmesi için HRP (Horseradish peroksidaz) enzimine ihtiyaç duyulmaktadır. En temel ihtiyaç duyulan OPI medium, HRP enzimi ve protein G kolonu dışında laboratuvarda hücre kültürü, hibridoma çalışmaları, PCR analizleri için de birkaç ek sarf malzemeye ihtiyaç duyulmaktadır. Çalışma sonunda elde edilmesi hedeflenen monoklonal antikorlar hem antijen-ELISA geliştirilmesinde kullanılacak hem de ileri proje çalışmalarında (teşhis metotları geliştirilmesi, tedaviye yönelik proje çalışmaları vb.) kullanılabilecektir.
Bu doktora tez projesi ile sahadan virus izole edilerek monoklonal-poliklonal antikor üretilerek antijen-ELISA geliştirilmesi amaçlanmıştır.